Phos-tag™ Agarose
亲和层析纯化磷酸化蛋白
填入色谱柱中使用。可分离、纯化、浓缩磷酸化蛋白。不使用界面活性剂、还原剂,可得到状态近似生物体内的磷酸化蛋白。
◆原理
◆优点、特色
● 缓冲液不含有界面活性剂、还原剂。
● 与亲和层析方法类似。
● 可在1小时内纯化磷酸化蛋白。
● Phos-tag™ Agarose 捕获结合到 Tyr、Thr、Ser、Asp、His 等氨基酸、糖类、脂类上的无机磷酸根和大量二价磷酸根。
● 可在生理条件下(pH7.5)捕捉蛋白。
● 纯化后的产物可用于 Co-IP 实验和其他蛋白活性实验。
◆案例、应用:
【使用例子:A431 裂解液中的磷酸化蛋白的纯化】
把Phos-tag™ 填充到柱里,再加上 A431 裂解液。
SYPRO Ruby 染色(左图)再使用 Anti-p Tyr 抗体进行免疫印迹(右图),检测出结果。
结果确认磷酸化蛋白浓缩在柱吸附层里。
M:分子量标记
Lane 1:未吸附层
Lane 2:吸附层
Lane 3:柱清洗层