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公司名称:湖南晶科生物科技有限公司

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传真:0731-85160101

Q Q:372403785、3504420063

邮箱:jingkebio@163.com

服务编号
服务项目
相关产品
相关服务
DME01
MSP法
核酸提取与纯化产品
全基因组甲基化测序
DME02
BSP-克隆测序法
PCR/RT-PCR产品
DNA测序
DME03
HRM法检测
荧光定量PCR产品
荧光定量PCR
DME04
引物设计与合成
分子克隆产品
Western Blot
 

  服务项目:

  1.甲基化特异性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)

  用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在甲基化;反之,说明被检测的位点不存在甲基化。

  2.亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)

  用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。将PCR产物克隆至载体后进行测序,可以提高测序成功率,这种方法称为BSP-克隆测序法。

  3.高分辨率熔解曲线法(High Resolution Melting,HRM)

  在非CpG岛位置设计一对针对亚硫酸氢盐修饰后的DNA双链的引物,这对引物中间的片段包含感兴趣的CpG岛。若这些CpG岛发生了甲基化,用亚硫酸氢盐处理后,未甲基化的胞嘧啶经PCR扩增后转变成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变,样品中的GC含量发生改变,从而导致熔解温度的变化(图1)。

 

 

  图1 不同甲基化程度的样品(0%到100%)的HRM熔解曲线

 

  送样要求:

  细胞(≥106 个)、组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等样品材料,基因组DNA(体积≥20μl,浓度≥50 ng/μl)。

  提供结果:

  引物序列、实验报告、包括MSP产物的电泳图片;引物序列、测序峰图、阳性克隆质粒和实验报告;扩增曲线、熔解曲线及实验报告。

 
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